PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက်ဝင်ရောက်စွက်ဖက်အချက်များ

PCR တုံ့ပြန်မှုစဉ်အတွင်းအချို့သော 0 င်ရောက်စွက်ဖက်သောအချက်များမကြာခဏကြုံတွေ့ရလေ့ရှိသည်။
PCR ၏အလွန်အမင်းထိခိုက်လွယ်မှုကြောင့်ညစ်ညမ်းမှုသည် PCR ရလဒ်များကိုသက်ရောက်စေပြီးမှားယွင်းသောအပြုသဘောဆောင်သောရလဒ်များကိုဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည့်အရေးအကြီးဆုံးအချက်များအနက်မှတစ်ခုဖြစ်သည်။
အညီအမျှဝေဖန်ခြင်းသည်မှားယွင်းသောအနုတ်လက်ခဏာရလဒ်များကိုဖြစ်ပေါ်စေသောအရင်းအမြစ်အမျိုးမျိုးဖြစ်သည်။ အကယ်. PCR အရောအနှော (သို့) amplification vagpliation ၏တစ်ခုသို့မဟုတ်တစ်ခုထက် ပို. မရှိမဖြစ်လိုအပ်သောအစိတ်အပိုင်းများသို့မဟုတ် 0 င်ရောက်စွက်ဖက်ခြင်းများကိုတားမြစ်ထားခြင်းသို့မဟုတ် 0 င်ရောက်စွက်ဖက်ခြင်းကိုတားဆီးပါကရောဂါရှာဖွေ assay ကိုအတားအဆီးဖြစ်စေနိုင်သည်။ ၎င်းသည်ထိရောက်မှုနှင့်မှားယွင်းသောဆိုးကျိုးများကိုပင်လျှော့ချနိုင်သည်။
ကြိုတင်ပြင်ဆင်ခြင်းမပြုမီသယ်ယူပို့ဆောင်ရေးနှင့် / သို့မဟုတ်သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကြောင့်ပစ်မှတ်ထားခြင်းနှင့် / သို့မဟုတ်သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကြောင့်ပစ်မှတ်ထားသောရည်မှန်းချက်ပန်းတိုင်ကိုဆုံးရှုံးခြင်းသည်ဖြစ်နိုင်သည်။ အထူးသဖြင့်မြင့်မားသောအပူချိန်သို့မဟုတ်မလုံလောက်သိုလှောင်မှုသည်ဆဲလ်များနှင့်နျူကလီးယားအက်ဆစ်များကိုပျက်စီးစေနိုင်သည်။ ဆဲလ်နှင့်တစ်ရှူး fixation နှင့် paraffin embedding သည် DNA ကိုအပိုင်းအစများနှင့်အမြဲတမ်းပြ problem နာများ၏အကြောင်းရင်းများကိုလူသိများသည် (ပုံ 1 နှင့် 2 ကိုကြည့်ပါ) ။ ဤဖြစ်ရပ်များတွင်အကောင်းဆုံးအထီးကျန်ခြင်းနှင့်သန့်စင်ခြင်းတို့သည်ပင်မကူညီနိုင်ပါ။

ပုံ 1 | DNA သမာဓိရှိရွေ့လျားမှု၏အကျိုးသက်ရောက်မှု
Agarose Gel Elevrophoresis သည် DNA ၏အရည်အသွေးသည် autopsies ၏ paraffin ၏ paraffin မှသီးခြားစီသီးခြားစီခွဲထားကြောင်းပြသခဲ့သည်။ ပျမ်းမျှအားဖြင့်မတူကွဲပြားသောပျမ်းမျှအပိုင်းအစများမှေးမှိန်သည် fixation method ပေါ် မူတည်. ထုတ်ယူခြင်းတွင်ဖော်ပြထားသည်။ DNA ကိုမိခင်အေးခဲနေသောနမူနာများတွင်တပ်ဆင်ထားသည့်အခါသာထိန်းသိမ်းထားသည်။ ပြင်းပြင်းထန်ထန်အက်ဆစ် bouin fixative သို့မဟုတ် unbuffered ကိုအသုံးပြုခြင်း, ကျန်ရှိသောအစိတ်အပိုင်းအလွန်အမင်းကွဲပြားခြားနားသည်။
ဘယ်ဘက်တွင်, အပိုင်းအစများ၏အရှည်ကို kilobase အားလုံးအတွက် (KBP) တွင်ဖော်ပြထားသည်။

ပုံ 2 Nucleic အက်ဆစ်ပစ်မှတ်များ၏သမာဓိကိုဆုံးရှုံးမှု
(က) Strand နှစ်ခုစလုံးတွင် 3'-5 '' ကွာဟချက်သည် DNA ကိုချိုးဖောက်လိမ့်မည်။ DNA ၏ပေါင်းစပ်မှုသေးငယ်တဲ့အပိုင်းအစအပေါ်မှာပေါ်ပေါက်လိမ့်မယ်။ သို့သော် DNA အပိုင်းအစတွင် Primer Annealing site ပျောက်ဆုံးနေပါက linear amplification ကိုသာတွေ့ရှိနိုင်သည်။ အဆင်သင့်ဆုံးအမှုအရာမှာအပိုင်းအစများသည်တစ် ဦး နှင့်တစ် ဦး ပြန်လည်စတင်နိုင်သော်လည်းအထွက်နှုန်းသည်သေးငယ်သောအရာနှင့်ရှာဖွေတွေ့ရှိမှုအဆင့်များကိုအောက်တွင်ဖော်ပြထားသည်။
(ခ) အဓိကအားဖြင့်အန်နာခြင်းနှင့်လုံးလုံးလျားလျားတိုးတက်မှုကြောင့်အဓိကအားဖြင့်အခြေစိုက်စခန်းများဆုံးရှုံးခြင်းသည် H-bonds အရေအတွက်နှင့် TM တွင်ကျဆင်းခြင်းကိုလျော့နည်းစေသည်။ အသည်းအသန်ပူနွေးထွေးမှုအဆင့်တွင် Primer သည် Matrix DNA မှအရည်ပျော်သွားပြီးတင်းကြပ်သောအခြေအနေများအောက်တွင်တောင်မှကြေငြာခြင်းမပြုပါ။
(ဂ) ကပ်လျက်အင်းမင်အခြေစိုက်စခန်းများသည် tt dimer ကိုဖွဲ့စည်းသည်။
မော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေရေးတွင်မကြာခဏဖြစ်ပေါ်လေ့ရှိသောအခြားပြ problem နာတစ်ခုမှာ Phenol-chloroforoform ထုတ်ယူခြင်းနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါကပစ်မှတ်ထားသော nucleic acids ၏အကောင်းဆုံးပြ issuerment နာများဖြစ်သည်။ ပြင်းထန်သောဖြစ်ရပ်များတွင်၎င်းသည်မှားယွင်းသောဆိုးကျိုးများနှင့်ဆက်စပ်နိုင်သည်။ lysis ၏ပွက်ပွက်ဆူနေသော (သို့) ဆဲလ်အပျက်အစီးများကိုအစာရှောင်ခြင်းဖြင့်အချိန်အကြာကြီးသိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။

amplification ကာလအတွင်း polymerase လှုပ်ရှားမှုတားမြစ်

ယေဘုယျအားဖြင့် chibition ကို consibition ကိုကွန်တိန်နာ concept တစ်ခုအဖြစ်အသုံးပြုသည်။ တင်းကြပ်စွာဇီဝဗေဒဆိုင်ရာသဘောသဘာဝအရ chebition သည်အင်ဇိုင်း၏လှုပ်ရှားမှုနှင့်သက်ဆိုင်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ DNA Polymerase သို့မဟုတ် Cofactor အတွက် MG2 + အတွက် MG2 + + MG2 + + (ဥပမာ - MG2 + +) ။
နမူနာသို့မဟုတ်ဓာတ်လှေကားပါ 0 င်သောနမူနာသို့မဟုတ်ထုတ်ယူမှုအမျိုးမျိုးရှိအစိတ်အပိုင်းများကို adzyme ကိုတိုက်ရိုက်တားဆီးနိုင်သည်သို့မဟုတ်၎င်း၏ cofactors (ဥပမာ - ECHTA) ကို 0 မ်းနည်းစေခြင်း,
သို့သော်တုံ့ပြန်မှုအစိတ်အပိုင်းများနှင့်ပစ်မှတ်ထားသော nucleic acids များအကြားအပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုများစွာကို 'pcr inhibitors' အဖြစ်သတ်မှတ်သည်။ ဆဲလ်များ၏သမာဓိကိုအထီးကျန်ခြင်းဖြင့်နှောင့်ယှက်ခြင်းဖြစ်ပြီး Nucleic acid ကိုဖြန့်ချိသည်နှင့်နမူနာနှင့်၎င်း၏ပတ် 0 န်းကျင်ဆိုင်ရာအဖြေများအကြားအပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုများအကြားအပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုကိုဖြစ်ပေါ်စေသည်။ ဥပမာအားဖြင့် 'scavengers' သည် covalent interaction မဟုတ်သော interaction များဖြင့်တစ်ကိုယ်ရေသို့မဟုတ်နှစ်ဆသောင်နစ်သော DNA ကိုချည်နှောင်ခြင်းနှင့်နောက်ဆုံးတွင် PCR တုံ့ပြန်မှုရေယာဉ်အရေအတွက်ကိုရောက်စေခြင်းအားဖြင့်အထီးကျန်ခြင်းနှင့်သန့်ရှင်းရေးကို 0 င်ရောက်စွက်ဖက်နိုင်သည်။
ယေဘုယျအားဖြင့် PCR Heibitors တွင်လက်တွေ့ရောဂါရှာဖွေရေးစမ်းသပ်မှုများ (ဆီးဆေး, ဟီမိုဂလိုဂ်စ်တို့အားဆီးအိမ်များ, အူသိမ်အူပင်စင်,

ပိုမိုပျံ့နှံ့နေသော pcrerication compibititors များကိုဘက်တီးရီးယားများနှင့် Eukaryotic ဆဲလ်များ, ပစ်မှတ်မဟုတ်သော DNA, DNA-binding macromolelocules များ၌တွေ့နိုင်သည်။ ထုတ်ယူစဉ်အတွင်းသို့မဟုတ်ပြီးနောက်အရေးယူသည့်အရာနှင့်အပြီးတွင် nucleic acids များကိုသန့်စင်ခြင်းသည် PCR inhibitors ဖယ်ရှားခြင်းအတွက် ဦး စားပေးနည်းလမ်းဖြစ်သည်။
ယနေ့တွင်အမျိုးမျိုးသောအလိုအလျောက်ထုတ်ယူသောပစ္စည်းကိရိယာအမျိုးမျိုးသည်လက်စွဲ protocol များစွာကိုအစားထိုးနိုင်သည်။ အလားအလာရှိမယ်များကိုသန့်ရှင်းသောနျူကလီးယားအက်ဆစ်များတွင်ရှိနေဆဲသို့မဟုတ်အကျိုးသက်ရောက်မှုကိုခံယူကြပေမည်။ inhibitors ၏သက်ရောက်မှုကိုလျှော့ချရန်ကွဲပြားခြားနားသောနည်းဗျူဟာများတည်ရှိ။ သင့်လျော်သော polymerase ၏ရွေးချယ်မှုသည် infibitor လှုပ်ရှားမှုအပေါ်သိသိသာသာသက်ရောက်မှုရှိနိုင်သည်။ PCR တားမြစ်ချက်ကိုလျှော့ချရန်အခြားသက်သေပြနိုင်သည့်နည်းလမ်းများသည် polymerase အာရုံစူးစိုက်မှုတိုးပွားလာခြင်းသို့မဟုတ် BSA ကဲ့သို့သောအမြှေးများကိုကျင့်သုံးခြင်းဖြစ်သည်။
ပြည်တွင်းလုပ်ငန်းစဉ်အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု (IPC) အသုံးပြုခြင်းဖြင့် PCR တုံ့ပြန်မှုများကိုတားမြစ်နိုင်သည်။
Ethanol, Edta, Edta, Cetab, Cetab, Cetab, Cetab, GSopanol နှင့် Phenol စသည့် Nucleic အက်ဆစ်ခွဲစိတ်ခြင်း မှနေ. Nucleic အက်ဆစ်ခွဲစိတ်ခြင်းစသည့် Etanic acid, isopropanol နှင့် phenol တို့ပါ 0 င်သောဓါတ်ကူပစ္စည်းအားလုံးကိုဖယ်ရှားရန်ဂရုပြုရမည်။ သူတို့အာရုံစူးစိုက်မှုပေါ် မူတည်. ၎င်းတို့သည် PCR ကိုသက်ဝင်စေနိုင်သည်သို့မဟုတ်တားမြစ်နိုင်သည်။