Polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု (PCR) သည် သိပ္ပံပညာရှင်များအား တိကျသေချာပြီး ထိရောက်မှုဖြင့် သီးခြား DNA များကို ချဲ့ထွင်နိုင်စေမည့် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒကို တော်လှန်ပြောင်းလဲစေခဲ့သည်။ လုပ်ငန်းစဉ်၏ အဓိကအချက်မှာ DNA denaturation၊ annealing နှင့် extension အတွက် လိုအပ်သော အပူချိန်သံသရာများကို ထိန်းချုပ်သည့် အရေးကြီးသော PCR thermal cycler ကိရိယာဖြစ်သည်။ သို့သော်လည်း PCR အပူစက်ဘီးစီးသူ၏ ထိရောက်မှုသည် ၎င်း၏ ချိန်ညှိမှုပေါ်တွင် များစွာမူတည်ပါသည်။ ဤဆောင်းပါးသည် PCR thermal cycler calibration ၏ အရေးပါမှုနှင့် စမ်းသပ်မှုရလဒ်များအပေါ် ၎င်း၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို စူးစမ်းလေ့လာထားသည်။
စံကိုက်ညှိခြင်းPCR အပူစက်ဘီးစီးသူစက်ပစ္စည်းသည် သတ်မှတ်ထားသော အပူချိန်အကွာအဝေးအတွင်း လည်ပတ်နေပြီး အောင်မြင်သော အသံချဲ့စက်အတွက် လိုအပ်သော တိကျမှုကို ထိန်းသိမ်းထားကြောင်း သေချာစေသည်။ စက်ဝန်း၏ အဆင့်တစ်ဆင့်ချင်းစီသည် တိကျသော အပူအခြေအနေများအပေါ် မူတည်သောကြောင့် PCR တွင် အပူချိန်ထိန်းချုပ်မှုသည် အရေးကြီးပါသည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ denaturation အဆင့်တွင်၊ DNA ကြိုးများကို ခွဲခြားရန် 94-98°C ဝန်းကျင်တွင် အပူပေးရမည်။ အပူချိန် အလွန်နိမ့်ပါက၊ မပြည့်စုံသော denaturation ဖြစ်ပေါ်လာနိုင်ပြီး ချဲ့ထွင်မှု အားနည်းသွားနိုင်သည်။ အပြန်အလှန်အားဖြင့် အပူချိန်မြင့်မားပါက၊ ၎င်းသည် DNA သို့မဟုတ် တုံ့ပြန်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် အင်ဇိုင်းများကို ပျက်စီးစေနိုင်သည်။
ထို့အပြင်၊ annealing အဆင့်သည် အသုံးပြုထားသော primers များ၏ အရည်ပျော်သည့်အပူချိန်ဖြင့် ဆုံးဖြတ်လေ့ရှိသည့် သီးခြားအပူချိန်တစ်ခု လိုအပ်ပါသည်။ အပူစက်ဘီးကို မှန်ကန်စွာ ချိန်ညှိမထားပါက၊ လျှပ်စီးကြောင်းအပူချိန် ပိတ်သွားမည်ဖြစ်ပြီး၊ အတိအကျမဟုတ်သော ချည်နှောင်မှု သို့မဟုတ် စည်းနှောင်မှု လုံးဝကင်းမဲ့သွားနိုင်သည်။ ၎င်းသည် အထွက်နှုန်းနည်းခြင်း သို့မဟုတ် မလိုလားအပ်သော ထုတ်ကုန်များ၏ ချဲ့ထွင်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ပြီး၊ နောက်ဆုံးတွင် စမ်းသပ်မှု၏ သမာဓိကို ထိခိုက်စေနိုင်သည်။
ယုံကြည်စိတ်ချရပြီး မျိုးပွားနိုင်သောရလဒ်များကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် PCR အပူစက်ဘီးများကို ပုံမှန်ချိန်ညှိခြင်းသည် မရှိမဖြစ်လိုအပ်ပါသည်။ အချိန်ကြာလာသည်နှင့်အမျှ၊ အပူစက်ဘီးသမားများသည် ဝတ်ဆင်ခြင်းနှင့် မျက်ရည်ယိုခြင်း၊ ပတ်ဝန်းကျင်ပြောင်းလဲမှုများနှင့် ပါဝါထောက်ပံ့မှုအတက်အကျများကဲ့သို့သော အကြောင်းရင်းများကြောင့် ၎င်းတို့၏ ချိန်ညှိခြင်းဆက်တင်များမှ လွင့်ပျံသွားနိုင်သည်။ ပုံမှန် ချိန်ညှိခြင်းစစ်ဆေးမှုများသည် ဤကွဲပြားမှုများကို ခွဲခြားသိရှိနိုင်ပြီး ကိရိယာသည် အကောင်းဆုံးလည်ပတ်နေကြောင်း သေချာစေနိုင်သည်။ တိကျသောတိုင်းတာမှုများသည် အရေးပါသည့် သုတေသနပတ်ဝန်းကျင်များတွင် အထူးသဖြင့် အရေးကြီးသည်
တိကျသောအပူချိန်ထိန်းချုပ်မှုကိုသေချာစေသည့်အပြင်၊ ချိန်ညှိခြင်းသည် PCR အပူစက်ဘီးစက်၏အလုံးစုံစွမ်းဆောင်ရည်အတွက်အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှပါဝင်သည်။ ကောင်းစွာချိန်ညှိထားသောစက်သည် ပစ်မှတ် DNA ၏အထွက်နှုန်းကိုတိုးစေပြီး PCR လုပ်ငန်းစဉ်၏ထိရောက်မှုကိုတိုးစေသည်။ ဆဲလ်တစ်ပိုင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း သို့မဟုတ် ရှေးခေတ် DNA သုတေသနများကဲ့သို့ အကန့်အသတ်ရှိသော အစပြုပစ္စည်းပါရှိသော အက်ပ်များတွင် ၎င်းသည် အထူးအရေးကြီးပါသည်။ ချဲ့ထွင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်၏ ထိရောက်မှုကို အမြင့်မားဆုံးပြုလုပ်ခြင်းဖြင့်၊ သုတေသီများသည် စီတန်းခြင်း သို့မဟုတ် ပုံတူပွားခြင်းကဲ့သို့သော ရေအောက်ပိုင်းအပလီကေးရှင်းများအတွက် လုံလောက်သော DNA ပမာဏကို ရရှိနိုင်သည်။
ထို့အပြင်၊ စံကိုက်ညှိခြင်း၏ အရေးပါမှုသည် စမ်းသပ်မှုတစ်ခုထက် ကျော်လွန်ပါသည်။ ဆေးဘက်ဆိုင်ရာဓာတ်ခွဲခန်းများကဲ့သို့သော စည်းကမ်းထိန်းသိမ်းရေးပတ်ဝန်းကျင်များတွင် တင်းကျပ်သော အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုအစီအမံများကို လိုက်နာရမည်ဖြစ်သည်။ PCR အပူစက်ဘီးများကို ပုံမှန်ချိန်ညှိခြင်းသည် စည်းမျဉ်းစည်းကမ်းစံနှုန်းများနှင့် ကိုက်ညီမှုရှိရန် လိုအပ်ချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။ သင့်လျော်သော ချိန်ညှိမှုကို ထိန်းသိမ်းရန် ပျက်ကွက်ခြင်းသည် လူနာပြုစုစောင့်ရှောက်မှုနှင့် ကုသမှုဆိုင်ရာ ဆုံးဖြတ်ချက်များအတွက် ပြင်းထန်သော သက်ရောက်မှုများ ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည် ။
နိဂုံးချုပ်အားဖြင့် calibration ofPCR အပူစက်ဘီးစီးသူများမေ့မရနိုင်သော မော်လီကျူး ဇီဝဗေဒ၏ အခြေခံ ကဏ္ဍတစ်ခုဖြစ်သည်။ တိကျသောအပူချိန်ထိန်းချုပ်မှုသည် PCR ၏အောင်မြင်မှုအတွက်အရေးကြီးပြီး ပုံမှန်ချိန်ညှိမှုပြုလုပ်ခြင်းသည် လိုအပ်သောသတ်မှတ်ချက်များအတွင်းအပူစက်ဘီးလည်ပတ်ကြောင်းသေချာစေသည်။ စံကိုက်ချိန်ညှိခြင်းကို ဦးစားပေးလုပ်ဆောင်ခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် ၎င်းတို့၏ရလဒ်များ၏ ယုံကြည်စိတ်ချရမှုနှင့် မျိုးပွားနိုင်မှုကို မြှင့်တင်နိုင်ပြီး နောက်ဆုံးတွင် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒနယ်ပယ်နှင့် ၎င်း၏အသုံးချမှုများအတွက် ဆေးပညာ၊ မျိုးရိုးဗီဇနှင့် အခြားအရာများကို မြှင့်တင်နိုင်သည်။ တိကျပြီး တိကျသော မော်လီကျူးနည်းပညာများ လိုအပ်ချက်သည် ဆက်လက်ကြီးထွားလာသည်နှင့်အမျှ ကောင်းစွာချိန်ညှိထားသော PCR အပူစက်ဘီးကို ထိန်းသိမ်းထားရန် အရေးကြီးမှုသည် ပို၍ထင်ရှားလာမည်ဖြစ်သည်။
စာတိုက်အချိန်- မတ်-၂၀-၂၀၂၅